Лабораторная диагностика гепатита — советы врачей

Одно из самых опасных вирусных заболеваний печени — гепатит. Ключевой фактор успешной терапии против вирусов – ранняя и точная диагностика, проводящаяся на основе лабораторных исследований. Поэтому анализ на гепатит назначается многими узкопрофильными врачами перед проведением любой манипуляции, при беременности или при подозрении на патологические процессы в этом органе.

СТОИМОСТЬ ОБСЛЕДОВАНИЯ ПЕЧЕНИ В НАШЕЙ КЛИНИКЕ В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ

Чем опасен гепатит для человека

Любые патологии, развивающиеся в печени – серьезный повод для беспокойства. Этот орган — своеобразный фильтр, очищающий кровь от токсинов. Печень выводит ядовитые соединения из организма или нивелирует их влияние. Больная печень не справляется со своими функциями, и организм постепенно отравляется.

Гепатиты – это коварные заболевания, которые приводят к циррозу и раку печени, поэтому их нужно срочно выявлять и лечить. И цирроз, и рак печени практически неизлечимы.

Что такое анализ на гепатит: экспресс тест и полная диагностика

Анализами или тестами называют методы лабораторного исследования, выполняемые для точного определения наличия антител к вирусам гепатита. Сначала может проводиться экспресс тест. Его назначают когда все симптомы заболевания налицо, и нужно получить результаты срочно.

Экспресс-метод подразумевает прокол пальца для получения капли крови. Ее помещают на специальную чувствительную тест полоску, и результат через несколько минут готов. Полученные данные не являются основанием для постановки точного диагноза, но дают возможность определиться с тактикой дальнейшей диагностики.

Комплексное обследование на гепатит – это не одна процедура, а несколько методов получения и анализа биологического материала, дополняющие друг друга:

• общий и биохимический анализ крови;
• коагулограмма (тест на свертываемость крови);
• исследование сыворотки крови на антитела (ИФА);
• определение ДНК или РНК вируса.

Вероятность инфицирования печени при таком обследовании будет самой точной, поскольку основанием для постановки диагноза является целый ряд показателей.

Дополнить диагностику нужно УЗИ брюшной полости, с тщательным осмотром печени.

Когда назначается

Любой желающий может проверить свое здоровье и сдать анализы в процедурном кабинете клиники. Для этого не потребуется направление — достаточно сказать о свое желании пройти тест.

Обязательное направление на обследование от терапевта, гастроэнтеролога или гепатолога получают пациенты с желтушностью кожных покровов, слабостью, тошнотой, лихорадочным состоянием, потерей аппетита и тяжестью в правом подреберье. Это основные клинические проявления гепатита любого вида.

Также назначается процедура, когда повышена концентрация внутриклеточных ферментов АсАт и АлАт.

В обязательном порядке кровь сдают доноры, сотрудники медучреждений, специалисты, контактирующие с людьми и беременные женщины.

Подготовка к анализам

Взятие биоматериала проводится на голодный желудок: последний прием пищи осуществляется не позднее, чем за 8 часов до проведения диагностики. Рекомендуется отказаться накануне от курения, употребления алкоголя, жирной еды, физических нагрузок.

Как проводится анализ

Это несложная быстрая процедура – кровь берется из вены, заключение готово, как правило, на второй день. Для получения более корректного результата требуется соблюдать рекомендации доктора по подготовке. Негативное влияние на результаты могут оказать бессонница, стресс. После взятия биоматериала человек может сразу отправляться домой.

Что показывает тест на гепатит

Возможны 2 варианта ответа в результатах анализа:

• Формулировка в заключении «отрицательный результат» – РНК вирус не обнаружен, инфицирования нет. Отрицательный ответ свидетельствует о том, что реакции на присутствие антигеном соответствующего типа не произошло.
• Формулировка в описании анализа «положительный», говорит о необходимости повторного обследования для уточнения результата и предположительно, что человек серьезно болен.

Также в результатах указывается, какой именно вирус присутствует в печени.

Маркеры инфицирования вирусом по видам гепатита

Гепатит A – самая доброкачественная форма инфекции, практически не вызывает осложнений и серьезных поражений печени.

Показания для назначения анализа на гепатит А:

• клинические проявления вируса;
• повышенный уровень АлАТ и АсАТ;
• контакт с носителем инфекции;
• холестаз (задержка выхода желчи).

Уточнить диагноз помогают следующие исследования сыворотки крови:

• метод полимеразной цепной реакции на обнаружение в крови участков РНК вируса;
• определение антител G-igG, которые вырабатываются во время развития патологии и остаются в крови навсегда;
• выявление в крови иммуноглобулинов M-igM.

Гепатит B приводит к осложнениям и значительному поражению печени, нередко результатом запущенного заболевания является цирроз и рак органа.

Показания для назначения анализов на гепатит В:

• подготовка к проведению вакцинации или подтверждение ее эффективности;
• клинические проявления вируса в отсутствие HBs-антигена.

Для постановки точного диагноза проводятся следующие тесты:

• анализы на наличие антител Anti-HBclgG и антигена HBsAg;
• качественные тесты на антитела Anti-HBcgM и на белок HBeAg.

Гепатит C – самая коварная форма проявления болезни, отличающаяся бессимптомным течением. Обнаруживается, как правило, в хронической форме, когда начался процесс поражения печени.

Показания для сдачи анализов на гепатит С:

• клинические проявления вируса;
• подготовка к операции;
• планирование беременности;
• парентеральные манипуляции;
• холестаз;
• внутривенная наркомания.

Для постановки точного диагноза проводятся следующие анализы крови:

• на присутствие Anti-HCV и lgG;
• метод полимеразной цепной реакции на определение РНК вируса;
• исследование интерлейкин-25-бета;
• тест на антитела к разным антигенам вируса гепатита C.

Единственный точный метод диагностирования гепатита – исследование крови.

Что делать после анализа

Получив на руки анализ теста, не стоит его расшифровывать самостоятельно. Результаты нужно показать терапевту, а он уже решит что делать. При сомнительных результатах врач может отправить на повторную диагностику. Если результат на 100% подтверждает наличие гепатита, лечением пациента занимается инфекционист или гепатолог.

Особенности лабораторного обследования при вирусных гепатитах В и С

Когда вирус гепатита В или С проникает в ваш организм, иммунная система вырабатывает специальные белки, которые кровь разносит по организму, чтобы помочь побороть вирусы. Они называются антителами.

Основной тест на выявление гепатита В  — Поверхностный антиген (HBsAg, HBs антиген, HBs Ag, австралийский антиген). Он является поверхностным белком вируса гепатита В и может быть обнаружен в крови при остром или хроническом гепатите, а так же при носительстве вируса гепатита В.

Для гепатита С характерно обнаружение антител к вирусу анти-НСV. Но это не означает, что у вас гепатит С в активной стадии. У некоторых людей (у 2-3 из 10) иммунная  система способна самостоятельно избавиться от вируса, но у остальных 7-8 человек организм не может побороть вирус.

Есть два вида тестов, используемых для диагностирования состоявшегося контакта с вирусом гепатита В или С – ИФА (иммуноферментный анализ) и ЭХЛ (электрохемилюминисцентный анализ). Чувствительность и специфичность ИФА при этом составляет около 90%, а ЭХЛ – около 98%, поэтому в крайне редких случаях возможны ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Для определения наличия и активности вируса гепатита В или С вам понадобится сделать дополнительно соответствующие тесты.

Важно помнить:

Даже если у вас обнаружены  такие маркеры вирусных гепатитов как HBs антиген или  анти-НСV – это еще не означает, что инфекционный процесс активный. Поэтому важно сделать дополнительные тесты.

Только ваш врач может интерпретировать Ваши индивидуальные результаты тестирования и устанавливать клинический диагноз.

Для уточнения активности вируса ваш доктор, с целью детального обследования, назначит несколько дополнительных анализов крови, что бы узнать точно, что происходит внутри вас.

Эти анализы называются ПЦР — полимеразная цепная реакция, с помощью которого обнаруживают генетический материал вируса гепатита В или С, присутствующий в крови.  Один из анализов – качественный ПЦР, даст ответ на наличие вируса у вас.

Другой – количественный ПЦР, определит вирусную загрузку — как много у вас вируса гепатита B или С и насколько активен этот вирус. Еще один вариант ПЦР-анализа – генотипирование, применяется при гепатите С и позволяет определить какой генотип у вируса. 

Важно знать! Отрицательный результат качественного ПЦР-теста означает отсутствие вируса гепатита В или С в крови либо его крайне низкую активность.

Если у вас есть вирус гепатита В или С, то он не остается только в клетках печени, он также может быть обнаружен в вашей крови. Вирусы гепатитов очень активны и производят много копий самого себя. Анализ на вирусную загрузку — это единственный способ измерить сколько вирусов гепатита В или С присутствует у вас.

• Анализ на Вирусную загрузку очень важен по нескольким причинам:
• Первая: Анализ на вирусную загрузку скажет вам  присутствует ли у вас вирус или вы уже освободились от него.
• Вторая: Если вы беременная женщина, риск передачи вируса вашему ребенку очень низок, но если вы беременная женщина с высокой вирусной загрузкой, риск передачи вируса ребенку будет несколько выше.
• Третья: Если вы решите пройти терапию интерфероном,  анализ на вирусную загрузку поможет доктору узнать действует ли терапия и как долго требуется ее продолжать.

ПОМНИТЕ: Всегда делайте ваши анализы в одной лаборатории. Это позволит делать правильные оценки при сравнении получаемых результатов.

Что такое генотипирование?

Вирус гепатита С (сокращенно HCV) имеет несколько разновидностей. Фактически, есть шесть разных видов HCV. Эти виды называются генотипами и нумеруются от 1 до 6. Некоторые генотипы имеют дальнейшие разделения называемые субтипами (например 1a и 1b).

Для лечащего доктора очень важно знать генотип вашего вируса, так как разные вирусы с разными генотипами по разному поддаются лечению (отвечают на терапию). Например, генотип 1 немного сложнее лечить, чем генотипы 2 или 3. И терапия 1-го типа HCV требует доз препаратов, отличных от применяемых при терапии с генотипами 2 или 3.

Наличие у вас определенного генотипа не означает, что вы больны больше или меньше. Но некоторые генотипы (например, 3) могут быть связаны с определенными состояниями печени, такими как ожирение.

1. Важно помнить, что у большинства людей гепатит С вообще не проявляется в виде каких-либо симптомов — независимо от генотипа вируса.
2. Знание генотипа вируса важно по нескольким причинам: 
3. Во-первых: Если вы решите пойти на терапию, тест на генотип позволит предсказать ваши шансы на избавления от вируса.
4. Во-вторых: тест на генотип вируса поможет вашему доктору определить необходимые дозы препаратов и длительность вашей терапии.
5. ПОМНИТЕ: Что наличие у вас вируса того или иного генотипа не значит, что вы больны легче или тяжелее.

Важно! В сети КДЛ «ОЛИМП» можно пройти комплексное обследование на гепатит В и С на европейском оборудовании, обеспечивающем высокое качество и достоверность результатов.

Вирусные гепатиты. Первичная диагностика

[40-080] Вирусные гепатиты. Первичная диагностика

1800 руб.

• Комплексный анализ крови, направленный на первичную диагностику основных форм вирусных гепатитов.
• Синонимы русские
• Вирусные гепатиты А, В, С; первичная диагностика.
• Синонимы английские
• Hepatitis A, В, С Virus; primary diagnostics.
• Какой биоматериал можно использовать для исследования?
• Венозную кровь.
• Как правильно подготовиться к исследованию?
• Общая информация об исследовании

Вирусные гепатиты представляют собой заболевания, вызванные вирусами и приводящие к повреждению тканей печени. К данным вирусам относятся вирусы гепатита А, гепатита В и гепатита С. Анализ крови на гепатит позволяет определить заболевание и его возбудителя.

Гепатит А – это острая форма гепатита, вызванная вирусом гепатита А (ВГА, HAV) при употреблении загрязненных вирусом пищи или воды, а также при контакте с больным человеком. В отличие от других вирусных гепатитов, гепатит А не переходит в хроническую форму течения.

При проникновении вируса в организм человека в результате стимуляции иммунной системы происходит выработка антител – иммуноглобулинов класса IgM. Они обычно появляются в первые 2-3 недели с момента инфицирования и сохраняются от 2 до 6 месяцев.

Поэтому в ранней лабораторной диагностике данной формы гепатита рекомендовано выявление анти-HAV IgM антител в крови в целях диагностики при подозрении на вирусный гепатит А, при симптомах острого гепатита, в частности в детском возрасте, а также для диагностики бессимптомного течения гепатита А.

Вирус гепатита С (ВГС, HCV) – это РНКсодержащий вирус семейства Flaviviridae, поражающий печень и приводящий к развитию хронического гепатита С, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциноме.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (при переливании элементов крови и плазмы, пересадке донорских органов, через нестерильные шприцы, иглы, при гемодиализе). Реже возможна передача вируса при половом контакте и от матери ребенку во время родов.

Острый ВГС часто протекает бессимптомно, только в 15-20 % случаев инфицирования появляются симптомы гепатита, тогда как в 70-85 % случаев заболевание переходит в хроническую форму.

Специфические антитела направлены к следующим составляющим компонентам вируса: ядру (нуклеокапсидному белку – core), оболочке (нуклеопротеинам Е1-Е2) и фрагментам генома вируса (неструктурным белкам NS). В сыворотке крови больных могут обнаруживаться иммуноглобулины классов IgM в случае острого течения инфекции и IgG в случае латентного течения, реактивации заболевания и при хронической форме ВГС.

Вирус гепатита В (ВГВ, HBV) широко распространен в современной популяции и является частой причиной развития острого и хронического гепатита, а также смертности от данного заболевания.

Инфицирование происходит через кровь и другие биологические жидкости, а также от матери к ребенку во время родов и кормления. Основным скрининговым маркером данного гепатита является поверхностный антиген вируса гепатита В (HВsAg).

Он обнаруживается в сыворотке крови больных при острой инфекции и в активной фазе хронической инфекции.

Также рекомендовано определение данного показателя при профилактическом осмотре в группах риска по заражению данным вирусом, у доноров компонентов крови, в случае подозрения на бессимптомное течение заболевания и в целях контроля формирования иммунитета после вакцинации против гепатита В.

Для чего используется исследование?

• Для первичной диагностики в случае подозрения на наличие инфицирования вирусным гепатитом, при наличии симптомов или при бессимптомном течении.
• Для диагностики острого вирусного гепатита А, а также для диагностики его бессимптомного течения.
• Для диагностики острого или хронического вирусного гепатита С, для выявления ранее перенесенного ВГС.
• Для диагностики острого или хронического вирусного гепатита В, для скрининга инфекции при отсутствии симптомов болезни, для выявления инфицирования и для контроля иммунитета после вакцинации.

Когда назначается исследование?

• При скрининговой диагностике вирусных гепатитов А, В, С.
• При симптомах острого гепатита, а также в случае бессимптомного течения заболевания.
• В группах лиц с повышенным риском инфицирования вирусными гепатитами В и С: работники здравоохранения, дети от инфицированных родителей, люди, не прошедшие вакцинацию против ВГВ, лица с иммунодефицитными состояниями; беременные.
• При сдаче донорской крови и ее компонентов, а также перед переливанием крови.

1. Что означают результаты?
2. Причины повышения и понижения индивидуальны для каждого исследуемого показателя в представленном комплексе.
3. Они могут свидетельствовать о наличии острой вирусной инфекции, активной фазе хронической формы инфекции, а также о бессимптомном носительстве вируса.
4. Что может влиять на результат?

• Ложноположительные результаты на ВГА – наличие аутоиммунных заболеваний; ВГС – наличие аутоиммунных заболеваний, в частности присутствие в крови ревматоидного фактора.



Также рекомендуется

• [07-002] Anti-HAV, IgM
• [07-009] Anti-HCV, антитела
• [09-010] HCV, генотипирование (типы 1a, 1b, 2, 3a, 4), РНК [реал-тайм ПЦР]
• [09-012] HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
• [09-160] Вирус гепатита С (тест-системы Hoffman-La-Roche)
• [07-010] Антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С
• [07-025] HBsAg
• [07-004] Anti-HBc, IgM
• [07-005] Anti-HBc, антитела
• [07-007] Anti-HBs, антитела
• [06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
• [06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
• [06-013] Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
• [06-045] Фосфатаза щелочная общая
• [06-036] Билирубин общий
• [06-037] Билирубин прямой
• [30-002] Билирубин непрямой

• Кто назначает исследование?
• Инфекционист, гастроэнтеролог, гепатолог, эпидемиолог, врач общей практики, терапевт, акушер-гинеколог, уролог, хирург, педиатр.
• Литература

1. Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo, Jameson, Loscalzo Harrison’s principles of internal medicine, 17th edition, 2009.
2. Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346.
3. Gerlich WH. Medical virology of hepatitis B: how it began and where we are now / Virol J. 2013 Jul 20;10:239.
4. Schüttler CG, Thomas C, Discher T, Friese G, Lohmeyer J, Schuster R, Schaefer S, Gerlich WH Variable ratio of hepatitis C virus RNA to viral core antigen in patient sera / J Clin Microbiol. 2004May;42(5):1977-81.

Анализы для определения гепатита С и что нужно знать? — Общая медицина

Общая медицина/13 мая 2019 11:38

Существуют различные способы диагностики, подтверждающие гепатит С. В первую очередь учитываются клинические исследования.

Подтверждают диагноз вирусологические, биохимические и инструментальные методы. Не все лабораторные исследования могут подтвердить заболевание сразу.

Поэтому, анализы для определения гепатита С потребуется брать несколько раз, с интервалом в 6 месяцев.

Особенности диагностики вируса

Как пишет портал gepatits.ru — гепатит с это единственный вирус, который содержит РНК. Именно поэтому, в острый период заболевания используется ПЦР метод, позволяющий по наличию цепочки определить вирус. Хроническая форма сопровождается наличием антител. Как правило, только спустя 1-6 месяцев они начинают определяться.

Оценка состояния печени необходима, чтобы определить выраженность патологических изменений, которые сопровождают гепатит С. Для выявления изменений врач может назначить:

• исследование пигментного обмена;
• определение концентрации в желчи желчных кислот, билирубина мочи;
• определение экскреторной функции печени;
• кровь на исследование сывороточных ферментов и др.

Лабораторные исследования

После проникновения вируса в организм, сразу определить его наличие невозможно. Потребуется время, чтобы возбудитель размножился, начал «атаковывать» клетки печени. В ответ должны начать вырабатываться антитела, по наличию которых и судят о заболевании. Для этого потребуется от одного месяца до полугода.

Период окна сопровождается отсутствием каких-либо признаков, в том числе, клинических, лабораторных, инструментальных. Кроме того, время проявления симптоматики зависит от иммунного статуса человека и наличия сопутствующих заболеваний. Чем слабее иммунитет – тем быстрее проявится гепатит С.

Специалисты назначают анализы, помогающие выявить антитела или фрагменты вируса, а также обнаружить отклонения в функционировании печени.

К лабораторной диагностике гепатита С относятся:

• биохимическое исследование – уточняет наличие билирубина, АЛТ, АСТ, что косвенно подтверждает патологические изменения в печени;
• общий анализ крови – помогает определить воспалительный процесс;
• анализ крови на количество вирусных частиц. С помощью метода удается уточнить тип вируса (их около 10) и назначить грамотное лечение.

ИФА

Метод ИФА позволяет обнаружить количественное содержание вируса, он основан на реакции «антиген — антитело». Анализ проводится в лаборатории, с использованием готовых антител или антигенов. Для исследования понадобится сыворотка крови. Ее соединяют с антигенами и ждут формирования иммунных комплексов. Одно из важных преимуществ анализа – высокая точность.

ПЦР и ее виды

Метод основан на принципах молекулярной биологии. Во время проведения применяются специальные ферменты, многократно копирующие участки РНК вируса гепатита С, который находится во взятой на исследование крови.

Затем, лаборанты сверяют результаты с базой данных, выявляя не только возбудителя, но и его концентрацию, что косвенно подтверждает время заболевания. Исследование проводится с помощью специального оборудования, нагревающего и охлаждающего биологический материал. Соблюдение температурного режима влияет на полученный результат.

С помощью определения интерлейкина 28 бета, который проводится методом ПЦР, можно сделать прогноз эффективности терапевтических мероприятий.

Кроме того, существуют следующие разновидности ПЦР:

• с использование горячего старта;
• длинных фрагментов;
• с обратной транскрипцией и др.

Домашние экспресс-тесты

В домашних условиях можно воспользоваться экспресс-диагностикой. С этой целью выпускаются тесты для крови, слюны. С их помощью можно обнаружить антитела. В упаковку входит необходимое оснащение (скарификатор, пипетка, буфер и др.) для манипуляции. В 90% случаев результат окажется правильным.

Какой анализ считается самым точным

В лабораторной диагностике самым точным методом, с помощью которого осуществляется выявление иммуноглобулинов разных классов (IgA, IgG, IgM) считается иммуноферментный анализ.

В зависимости от концентрации соответствующего антигена судят о стадии патологического процесса, то есть как давно человек болен гепатитом С.

ИФА – один из первых анализов, подтверждающий контакт вируса с клетками печени.

Малышев А.В., врач-терапевт

Новости

Серодиагностика вирусного гепатита В

Наиболее чувствительным показателем вирусной репликации является выявление ДНК вируса гепатита В в крови. Исследование на наличие ДНК в сыворотке крови  имеет большое значение при обследовании контактных лиц с целью наиболее раннего выявления инфекции.

ДНК вируса гепатита В обнаруживается при любых формах инфекции. Определение вирусной нагрузки (концентрация ДНК вируса гепатита В в крови) является важным параметром при определении показаний к лечению и контроля его эффективности.

HBeAg – вирусспецифический белок, является отдельным антигеном вируса.

При острой инфекции, которая завершается выздоровлением, HBeAg появляется в сыворотке крови вслед за поверхностным белком вируса и перестает обнаруживаться до исчезновения HBsAg. При хронической инфекции HBeAg присутствует в крови длительные сроки, свыше 6 месяцев.

Обнаружение HBeAg в сыворотке крови служит косвенным доказательством активной вирусной репликации.

HBсAg – сердцевинный антиген, обнаруживается только в ткани печени, поэтому практического значения этот маркер не имеет.

Большую диагностическую значимость имеют антитела к этому антигену (анти-НВс). Анти-НВс  начинают определяться в крови после появления первых клинических симптомов заболевания. Маркером ранней инфекции являются анти-НВс класса IgM. Определение их является одним из достоверных серологических критериев острого вирусного гепатита В.

Анти-HBc IgM выявляются через 1-2 недели после обнаружения HBsAg и сохраняются на протяжении 2-18 месяцев. У 4-20 % больных острым гепатитом В анти-HBc IgM являются единственным маркером инфекции. При хроническом вирусном гепатите В анти-НВс IgM могут быть выявлены у некоторых больных в меньших титрах, чем при острой инфекции, причем титр антител отражает тяжесть гепатита.

Анти-HBc IgM постепенно замещаются анти-НВс класса IgG.

Антитела этого класса удается обнаружить как у больных острым гепатитом В на различных стадиях инфекционного процесса, так и у больных хроническим вирусным гепатитом В, а также у лиц, перенесших в прошлом гепатит В и выздоровевших. Интерпретацию результатов в тестируемом образце проводят только с учетом выявления других маркеров инфекции.

Антитела к HBsAg (анти-НВs) свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции или о наличии поствакцинального иммунитета (защитный уровень — 10 МЕ/мл).

Они появляются в период выздоровления, через 4 недели после исчезновения HBsAg, достигая максимальной концентрации через 1-2 года, с последующим постепенным снижением уровня, недоступного выявлению современными методами диагностики.

Анти-HВs  обычно персистируют длительно, возможно в течении всей жизни. Появление анти-HBs на фоне клинического улучшения у больного гепатитом В является хорошим прогностическим признаком.

Важно отметить, что в динамике острой инфекции HBV имеется «окно», когда HBsAg уже не определяется, а анти-HBs еще не появились. При этом выявляются анти-HBc IgM и IgG. Из этого следует вывод о необходимости обследования больных ОВГ на анти-HBc IgM даже при отрицательных результатах исследования HBsAg и анти-НВs.

Антитела к HBeAg (анти-НВе) появляются в крови после элиминации HBeAg и завершения репликации вируса. К концу 9-й недели острого периода гепатита В более 90% больных имеют анти-НВе. В период выздоровления анти-НВе могут исчезать.

Однако, наличие анти-НВе не является показателем отсутствия инфекционности конкретной сыворотки крови. Показано, что у ряда больных в ходе развития гепатита В (около 10%) под влиянием «иммунного давления» на вирус возникают мутантные формы, которые «избегают» иммунного надзора и не элиминируются.

У носителей анти-HBe был выделен мутант, неспособный продуцировать HBeAg из-за дефектов в области precore и получивший обозначение HBeAg-отрицательного. Появление HBeAg-отрицательного мутанта приводит к прогрессированию поражения печени при продолжающейся репликации вируса (наличие ДНК HBV в сыворотке крови).

При первичном инфицировании HBeAg-отрицательным мутантом существенно возрастает риск развития фульминантного гепатита.

Вирусный гепатит В имеет свой серологический профиль (табл.1). Характер появления и исчезновения маркеров инфицирования зависит от наличия  у больного «дикого» или «мутантного» вируса гепатита В. При инфицировании «диким» штаммом вируса после завершения острого гепатита В  сохраняется синтез HBsAg. Выявляются показатели репликации вируса: HBeAg и ДНК HBV).  Анти-НВс  циркулируют параллельно с  HBsAg. Титры IgM к HBeAg могут колебаться, однако они ниже, чем при остром гепатите В. Интегративная фаза хронического гепатита В характеризуется прекращением синтеза HBeAg и через фазу «окна» по HBeAg/ анти-НВе регистрируют анти-НВе. При заражении или появлении мутантного по pre-core зоне ДНК вируса гепатита В регистрируется иной серологический профиль. Точечная мутация вируса гепатита В вызывает прекращение синтеза HBeAg, что ведет к более активной атаке на гепатоциты. На протяжении всего течения  хронического гепатита, при наличии анти-НВе, чередуются подъемы и спады активности сывороточных трансаминаз. Параллельно происходит репликация ДНК вируса и выявление анти-НВс IgM. Установлено, что частота формирования цирроза печени у больных хроническим гепатитом В с серологическим профилем «анти-НВе+/ДНК HBV+» выше, чем у больных, инфицированных «диким» штаммом (HBeAg+/ ДНК HBV+) (Турьянов, 1999). Таблица №1. Основные маркеры гепатита В при различных клинических формах.

Клиническая форма	HBsAg	HBeAg	Анти-HBc IgM	Анти-HBc сумм.	Анти-НВе	Анти-HВs	ДНК HBV
Острый гепатит В, «дикий» штамм	+	+	+	+	—	—	+
Острый гепатит В, «мутантный» штамм	+	—	+	+	—	—	+
Острый гепатит В разрешившийся; Сероконверсия	+	—	+/-	+	+	—	-/+
Хронический гепатит В активный	+	+	+/-	+	-/+	—	+
Хронический гепатит В интегративный	+/-	-/+	-/+	+	+/-	—	+/-
«Здоровое» носительство	+	—	—	+	—	-/+	—
Перенесенный вирусный гепатит В	—	—	—	+	-/+	+	—
Состояние после иммунизации	—	—	—	—	—	+	—

Серодиагностика вирусного гепатита С

Вирус гепатита С (HCV) является РНК содержащим гепатотропным и лимфотропным вирусом, относящимся к семейству Flaviviridae. Геном вируса   представлен одноцепочечной молекулой  РНК размером около 9500 оснований, кодирующей структурные и неструктурные белки   К  структурным белкам относят белок сердцевины и гликопротеины оболочки.

Неструктурную область представляет комплекс белков с ферментативной активностью, в первую очередь РНК-зависимая — РНК полимераза. Помимо вирусных белков, снаружи вирион покрыт липидной оболочкой,  состоящей из липопротеинов организма хозяина (рис.3).

Лабораторная диагностика  была решена при помощи современных методов молекулярной биологии, учитывая, что при гепатите С вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса.  В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-ВГС, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1).

Лабораторная диагностика гепатита С основывается на обнаружении серологических маркерв НСV: антител к вирусу гепатита С (анти-HCV, анти-HCV класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК HCV методом ПЦР.  К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем для выявления анти-HCV в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности.  РНК HCV является показателем активной репликации вируса гепатита С и самым ранним маркером инфекции, и может быть обнаружена методом ПЦР уже через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз.  Анти-HCV обнаруживаются к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц методом ИФА. При определении анти-HCV в некоторых случаях регистрируется ложноположительная реакция. Для разграничения ложноположительных образцов от образцов действительно содержащих антитела к вирусу, разработаны дополнительные тесты – рекомбинантный иммуноблотинг, определение спектра белков анти-HCV.

Спектр анти — HCV может различаться в зависимости от периода острого гепатита. Первым удается определить антитела, кодированные core и  NS5 зонами РНК вируса. Анти-HCV к белкам, кодированным NS4 зоной, в острую фазу гепатита С отсутствуют. Выявление РНК HCV считается «золотым» стандартом в диагностике гепатита С и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-HCV.  В настоящее время для индикации РНК HCV используется ПЦР в качественном и количественном варианте. Чувствительность методов определения РНК HCV повышается с каждым годом, достигая в настоящее время 10-50 копий РНК в 1 мл крови.  Диагноз хронического гепатита С у лиц с наличием анти-HCV обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев. Особенность вируса гепатита С – высокая изменчивость, не только в пределах различных стран, но и у одного и того же больного на протяжении заболевания. В мире наиболее распространены пять генотипов вируса гепатита С – 1а, 1в, 2а, 2в, 3а. Определение принадлежности вируса гепатита С к тому или иному генотипу (субтипу) необходимо для решения не только научных, но и практических вопросов. В настоящее время в большинстве случаев для генотипирования РНК вируса применяются методы, основанные на проведении ПЦР с использованием типоспецифических праймеров.

Серодиагностика вирусного гепатита D

Мы ждем Вас по адресу: 610000, г. Киров, ул. Свободы, 64А, корпус №3; http://www.sanepid.ru; e-mail:[email protected]; телефон: (8332) 38-19-16, 38-20-98.

Лабораторная диагностика гепатита В

Инкубационный период вируса гепатита B (ВГB) составляет до 180 дней, в среднем – 90 дней, может выявляться в крови у пациентов с острой формой заболевания за 2-8 недель до клинических проявлений заболевания. При хронической форме заболевания период циркуляции вируса гепатита B в крови неограничен.

Перенесенное в острой клинической форме заболевание ВГB приводит к формированию стойкого иммунитета. Защитную функцию выполняют антитела к HBsAg (далее – анти-HBs), которые появляются через 2-6 недель после заражения и сохраняются в течение всей жизни.

• Лабораторная диагностика  гепатита В основана на выявлении специфических для гепатита В антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:
• — НВsAg — анти-НВs                     
• — анти-НВс класса IgМ и IgG                         
• — НВеAg — анти-НВе                        
• — ДНК ВГВ
• Определение HBsAg осуществляется методами ИФА, ИХА а также мембранным экспресс-методом.
• Антитела к HBsAg являются маркером, свидетельствующим о ранее перенесенной инфекции либо о наличии поствакцинального иммунитета.

В случаях первичного обнаружения HBsAg, анти-HBsAg необходимо проведение конфирматорного теста. Первично-положительные по HBeAg результаты исследования подтверждаются конфирматорным тестом.

HBeAg представляет собой диагностический маркер, ассоциированный с высокой инфекционностью крови, активной репродукцией вируса гепатита В и риском перинатальной передачи возбудителя.

Выявление антител к HBeAg свидетельствует о завершении активной репродукции вирусных частиц и начале стадии реконвалесценции, за исключением мутантных форм вируса.

Наличие HBcAg в гепатоцитах свидетельствует об активной репродукции вирусных частиц.

Антитела к HBcAg класса M (далее – анти-НВс IgM) появляются через 1-2 недели после появления HBsAg и циркулируют в крови от 2 до 18 месяцев у пациентов с острым вирусным гепатитом B и у пациентов с хроническим вирусным гепатитом B (при реактивации инфекции).

Качественное определение ДНК вируса гепатита B методом ПЦР указывает на наличие и репродукцию в организме возбудителя.

Количественное обнаружение ДНК вируса гепатита B методом ПЦР (определение вирусной нагрузки) позволяет оценить активность репликации вируса и эффективность противовирусной терапии. Метод ПЦР используется также для определения генотипов вируса гепатита B с целью выбора оптимальной схемы лечения заболевания.

Забор крови для серологических исследований проводится с соблюдением правил асептики и антисептики в вакутайнеры или сухие центрифужные пробирки. В течение 24 часов с момента взятия образца крови он должен быть подвержен обработке с целью получения надосадочного слоя сыворотки крови, используемого для проведения дальнейших лабораторных исследований.

Кратковременное хранение сыворотки крови (до 3 суток) допускается при температуре от + 2°C до + 8°C. Более длительное хранение (до года) осуществляется при температуре не выше минус 20°C. Не допускается повторное размораживание и замораживание исследуемых образцов крови, поскольку это способствует появлению ложноотрицательных результатов.

1. Забор крови для исследований методом ПЦР осуществляется путем взятия венозной крови с соблюдением правил асептики и антисептики в сухие центрифужные пробирки или в пробирки с антикоагулянтом (калиевая или натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты).
2. Не допускается использование гепарина в качестве антикоагулянта ввиду его ингибирующего воздействия на амплификацию генов.
3. Врач серологического отдела
4. ЦДЛ городской больницы

Макас Е.Н.